So bereiten Sie eine Glycerin-Brühe vor: 9 Schritte (mit Bildern)

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So bereiten Sie eine Glycerin-Brühe vor: 9 Schritte (mit Bildern)
So bereiten Sie eine Glycerin-Brühe vor: 9 Schritte (mit Bildern)
Anonim

Glycerinstock ist eine Art Suspension, die in Laborumgebungen verwendet wird, um Bakterienkulturen über einen längeren Zeitraum aufzubewahren. Wenn flüssige Bakterienkulturen zu einer 50% Glycerinlösung hinzugefügt werden, infundiert das Glycerin in die Bakterienzellen, wodurch sie strukturell stabil werden und sie sicher gelagert werden können. Frieren Sie Ihre Proben nach dem Mischen bei −80 °C (−112 °F) ein, um sicherzustellen, dass sie so lange wie möglich lebensfähig bleiben.

Schritte

Teil 1 von 3: Mischen der Glycerinlösung

Bereiten Sie Glycerinstock vor Schritt 1

Schritt 1. Bereiten Sie eine Flüssigkultur der Bakterien vor, die Sie lagern möchten

Damit ein Glycerinstock wirksam ist, muss er mit einer flüssigen Bakterienkultur kombiniert werden. Um eine Flüssigkultur herzustellen, müssen Sie eine Bakterienprobe über Nacht in einem Erlenmeyerkolben, der mit Lysogenie-Brühe und der richtigen Konzentration an Antibiotikum gefüllt ist, inkubieren.

  • Sobald Sie eine Flüssigkultur hergestellt haben, können Sie die Bakterien einlagern oder die Plasmid-DNA isolieren.
  • Lysogenie-Brühe (auch bekannt als „LB-Brühe“und „LB-Flüssigkeit“) ist eine Art nährstoffreiche Flüssigkeit, die zur schnellen Vermehrung von Bakterien verwendet wird. Es kann bei einem Einzelhändler erworben werden, der Laborgeräte und -materialien verkauft.
  • Die Inkubation von Bakterienkulturen ist ein hochtechnischer Prozess mit vielen verschiedenen Variablen. Aus diesem Grund wird es am besten von einem geschulten Techniker in einer kontrollierten Laborumgebung durchgeführt.
Bereiten Sie Glycerinstock vor Schritt 2

Schritt 2. Verdünnen Sie reines Glycerin in destilliertem Wasser, um eine 50% Glycerinlösung zu erhalten

Mit einer sterilen Pipette 10 ml beider Flüssigkeiten abmessen und in einem einzigen Kolben vereinen. Rühren oder schütteln Sie den Kolben gründlich, bis die Flüssigkeiten gleichmäßig vermischt sind.

  • Das Verdünnen des Glycerins ist notwendig, um zu verhindern, dass es die Bakterienzellen schädigt.
  • Einige Wissenschaftler ziehen es vor, eine Glycerinlösung von nur 15-40% zu verwenden, um eine Beeinträchtigung der Bakterienkultur zu vermeiden. Eine Mischung von 50 % bietet jedoch maximale Haltbarkeit bei der Lagerung.
Bereiten Sie Glycerinstock vor Schritt 3

Schritt 3. 50 Mikroliter der 50% Glycerinlösung in ein Mikrozentrifugenröhrchen überführen

Bewegen Sie das verdünnte Glycerin vorsichtig in die neue Durchstechflasche, um ein Verschütten zu vermeiden. Sie verwenden denselben Behälter, um die Glycerinlösung mit der flüssigen Bakterienkultur zu infundieren und die Probe in einen Kühlraum zu stellen.

Verwenden Sie nach Möglichkeit eine Tube mit Schraubverschluss statt einer mit Schnappverschluss. Es ist bekannt, dass sich Röhrchen mit Schnappverschluss während des Mischens und längerer Lagerung versehentlich öffnen

Teil 2 von 3: Hinzufügen der Bakterienkultur

Bereiten Sie Glycerinstock vor Schritt 4

Schritt 1. Fügen Sie der Lösung 50 Mikroliter Ihrer flüssigen Bakterienkultur hinzu

Mit einer frischen Pipette eine gleiche Menge der Flüssigkultur abmessen und direkt in die Glycerinlösung im Röhrchen gießen. Die endgültigen Anteile Ihres Glycerinvorrats sollten 50 % Bakterien und 50 % verdünntes Glycerin sein.

  • Die Verwendung unverhältnismäßiger Mengen an Glycerin und Flüssigkulturen könnte die Widerstandsfähigkeit der Bakterien beeinträchtigen und ihre Überlebenszeit in der Kühllagerung verkürzen.
  • Wenn Sie eine Glycerinlösung mit einer niedrigeren Konzentration verwenden, müssen Sie die Menge der Bakterienkultur entsprechend anpassen. Weitere Informationen finden Sie in der Literatur zu der genauen Sorte, die Sie lagern.
Bereiten Sie Glycerinstock vor Schritt 5

Schritt 2. Setzen Sie den Deckel auf das Röhrchen

Schrauben Sie den Deckel fest oder drücken Sie ihn nach unten, bis Sie ein leises Klicken hören, wenn Sie ein Oberrohr mit Schnappverschluss verwenden. Vergewissern Sie sich, dass der Deckel fest sitzt, bevor Sie fortfahren.

Bereiten Sie Glycerinstock vor Schritt 6

Schritt 3. Schütteln Sie das Röhrchen vorsichtig, um die Bakterienkultur und das Glycerin zu mischen

Rühre das Röhrchen einige Male hin und her, bis beide Flüssigkeiten gleichmäßig verteilt sind. An diesem Punkt beginnen die Bakterienzellen langsam, die Glycerinlösung zu absorbieren, die die Zellmembran stabilisiert und vor Zerstörung und temperaturbedingten Schäden schützt.

Halten Sie Ihren Daumen beim Schütteln fest gegen den Deckel des Mikrozentrifugenröhrchens gedrückt, um sicherzustellen, dass er sich nicht löst

Teil 3 von 3: Aufbewahrung und Wiederbelebung von Bakterienkulturen

Glycerinstock vorbereiten Schritt 7

Schritt 1. Beschriften Sie die Bakterienprobe

Schreiben Sie den Namen der Kultur auf ein kleines Etikett für das Reagenzglas oder einen Streifen Klebeband und kleben Sie es gut sichtbar auf das Mikrozentrifugenröhrchen. Sie können die Klassifizierungsinformationen der Bakterien auch mit einem Filzstift direkt auf den Deckel schreiben.

  • Achten Sie darauf, auch alle anderen Informationen aufzuzeichnen, die sich während der Analyse als nützlich erweisen könnten, wie z. B. den genauen Stamm der Probe oder ihre Herkunft.
  • Das Etikettieren Ihrer Probenbehälter ist ein unverzichtbarer Schritt im Sammelprozess, da Sie so den Überblick über deren Inhalt beim Ein- und Auslagern behalten.
Bereiten Sie Glycerinstock vor Schritt 8

Schritt 2. Frieren Sie die Probe bei −80 °C (−112 °F) ein

Legen Sie die beschriftete Probe in einen unterkühlten Labor-Gefrierschrank, der auf eine konstante Temperatur von -80 °C (-112 °F) eingestellt ist. Unter diesen Bedingungen bleibt die Bakterienkultur für mehrere Jahre lebensfähig.

Es ist wichtig, dass die Temperatur des Gefrierschranks bei –80 °C (–112 °F) konstant bleibt. Wenn es wärmer wird, können die konservierten Bakterien absterben

Bereiten Sie Glycerinstock vor Schritt 9

Schritt 3. Kratzen Sie eine kleine Menge gefrorener Bakterien ab, um sie für die Analyse vorzubereiten

Wenn es an der Zeit ist, Ihre Probe wiederzubeleben, nehmen Sie das Mikrozentrifugenröhrchen aus dem Gefrierschrank und öffnen Sie den Deckel. Verwenden Sie eine sterile Impföse, einen Zahnstocher oder eine Pipettenspitze, um eine kleine Menge gefrorenen Materials von der Oberseite der Probe zu entnehmen und die Bakterien zur Untersuchung oder zum Testen auf eine LB-Agarplatte auszustreichen.

  • Achten Sie darauf, dass die Bakterien beim Schaben nicht auftauen. Es kann hilfreich sein, das Vorratsröhrchen auf Trockeneis zu halten, bis Sie Ihre Tests abgeschlossen haben.
  • Ziehen Sie Ihre Probe nur aus dem Gefrierschrank, wenn es unbedingt erforderlich ist. Wiederholtes Auftauen und Wiedereinfrieren verkürzt die Lebensdauer erheblich.

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